利用熒光顯微鏡檢測熒光標記物-細菌顯微鏡
熒光抗體法
熒光抗體法(fluorescent antibody,FA)自1942年創立發展以來,廣
泛地應用于醫學診斷和食品微生物檢測。特定抗原的抗體與熒光物質相結
合而發出熒光,當抗體與抗原發生反應時,抗體一抗原復合體發出熒光,
利用熒光顯微鏡檢測。熒光標記物通常是:羅丹明B(Rhodamine B)、熒光
異氰酸鹽和熒光異硫代異氰酸鹽;熒光異硫代異氰酸鹽應用最為廣泛。熒
光抗體(FA)技術可以采用兩種基本的方-法:直接法是利用抗原與特異的帶
有熒光物質抗體結合;間接法中同源抗體不與并不與熒光物質結合,而是
利用同源抗體的抗體(抗抗體)與熒光物質相連(抗原被同源抗體包圍,同源
抗體又被其抗抗體包圍,從而發出熒光)。在間接法標記物可以檢測同源抗
體的存在,直接法中標記物檢測抗原的存在。利用間接法不需要為每一待
檢的微生物制備熒光抗體。如果使用H免疫血清,FA技術就不需要沙門氏菌
的春培養物。最常用的共價是多價沙門氏菌OH球蛋白,用熒光異硫代氰酸
鹽標記用來檢測A~Z組菌體抗原。由于沙門氏菌抗血清體可以與其他相關
微生物發生反應,(例如:亞利桑那菌(A—zo”以)、檸檬酸桿菌(Citrobac
ter)、大腸桿菌(E.coli))。
因此,當檢測自然污染食品時會出現假陽性的結果。CherrY和Moody[
州綜述了FA技術在醫學微生物的應用;