ATP測定是一種預測微生物數量技術-分析顯微鏡
一種最簡單ATP測定法之一是利用螢火蟲的蟲熒光素一熒光素酶系統測定。
在ATP存在時,用熒光檢測器檢測熒光素酶發射的熒光強度。螢火蟲熒光素
的發光量與添加的ATP量成正比。
在臨床微生物學中,已經把ATP測定法作為一種預測微生物數量的快速
檢測方法應用。在臨床實驗中,利用這種方法篩檢尿樣。該方法成功用于
菌尿癥的診斷和活性淤泥中生物量的評價口,這表明它也應該適用于食品
微生物的檢測。ATP法能自動測定,代表它將是快速預測食品中微生物的有
效、方法。用于食品時需克服的主要問題非微生物ATP的去除。
ATP法通過擦拭指定區域和讀出熒光檢測器的相對光度單位(RLU)的方式,
已成為廣泛用于對食品表面進行現場監測的快速方法。由于非微生物ATP能
影響RLU讀數,這些方法雖然對監控是有價值的,但是不宜用于指示菌數。
DNA探針是由來源于目的生物體的DNA序列組成,可用于檢測同源的DNA或RN
A序列。在檢測時,探針DNA必須和待測菌株雜交。理論上,探針包含一個
編碼特定產物的序列。探針DNA必須通過某種方式標記以利于確定是否發生
了雜交。而mRNA、rRNA和質粒DNA則提供了多個目標,有助于形成更敏感的
檢測系統。合成的寡核苷酸探針可能有20~50個堿基組成,在合適的情況
下,只需30~60 min即可完成雜交。
在典型的探針操作中,未知生物體的DNA片段通過限制性內切核酸酶獲
得。經過電泳分離條帶后,轉移到硝酸纖維素膜上,并與標記探針雜交。
溫和地洗去DNA探針后,采用放射自顯影方法來檢測是否存在雜交產物。