應用目鏡測微尺測定分析顯微鏡-原生質測定實驗
當使用灌流小室時,所需的操作較為簡單。先把組織放在盛有一滴礦
泉水的敞開的灌流小室中,當滲透小室密封后,為檢驗正常的灌流運行,
先用礦泉水灌流片刻,然后用滲透溶液(如1M的脲溶液)代替礦泉水,且選
擇一個合適的細胞進行測定,該細胞的橫向細胞壁必須完全平行。即使有
一點不平行,也將導致原生質長度和時間關系圖的斜率發生改變,并使透
性常數產生偏差。只要原生質體末端是圓形的,在質壁分離復原之前,如
果可能的話,應用目鏡測微尺在適當的時間間隔內測定記錄原生質體的長
度
用原生質測定法測定水分透性
在許多生理過程中,活原生質對水的透性是一個非常重要的因素。原
生質透性的測定方法隨實驗條件和組織的不同而改變。測定質壁分離和質
壁分離復原可以進行水的絕對透性常數的計算,可直接與溶質的絕對透性
常數值相比較。
水的透性實驗裝置和測定步驟與上面介紹的相同。基本概念是。當細
胞從一非透過溶液中突然轉移到濃度相差較大的同樣溶液中時,盡可能地
密切注意原生質體長度相應的快速變化。細胞液與新的外部溶液問的滲透
平衡建立的時間進程可用來計算水的透性常數。
然而,這個平衡建立的時間進程也依賴于其它因素,如原生質粘度或
液泡內部的擴散阻力。在這些情況下,由于體積變化非常迅速,這些因素
比實驗中所用的滲透物質的影響更明顯。盡管這些因素使實驗的復雜性增
加,當選用的材料合適時,用原生質測定法仍能得到很好的結果。用這種
方法所求得的水的絕對透性常數與在植物材料中用擴散方法測得的水的透
性常數值處于同一數量級,且與用各種實驗方法在動物細胞中所測得結果
處于同一數量級。
為了使實驗結果更準確,使用縮時攝影技術可以更精確地建立原生質
體長度和時間的關系。就第二種處理溶液而言,既可使用高濃度,也可使
用低濃度。在高濃度溶液中發生部分質壁分離,而在低濃度溶液中發生質
壁分離復原。