激光細胞技術能提高樣品檢測效率-疫熒光檢測
人們還評價了采用激光掃描細胞技術,結合微分干涉對比(DIC
)確認的免疫熒光檢測技術的應用,并與隱孢子蟲卵囊人工顯微鏡
計數結果進行了比較。在30~230個的添加水平下卵囊的回收率達
到了50%。與傳統顯微鏡觀察相比,激光掃描細胞技術能提高樣品
處理量,避免操作人員主觀性和觀察疲勞。
盡管這些方法可以對環境水樣進行分析,但還沒有確證它們能
否在食品基質中應用?赡苌婕凹纳x傳播的果蔬與食品是多種多
樣的,這樣僅用一種方法很難實現寄生蟲的分離。分子診斷檢測技
術也是很復雜的一種方法,因為食品中抑制劑的存在會掩蓋其中的
寄生蟲。
還可以開發免疫檢測方法來對水樣中的隱孢子蟲進行鑒定。有
一種間接免疫熒光檢測方法對食品基質中隱孢子蟲的檢測非常有用
舊L“一。
適用于隱孢子蟲的絕大多數純化技術也適用于環孢子蟲的純化
(Ortega,私人通信)。隱孢子蟲所用的蔗糖和氯化銫梯度離心也可
用于環孢子蟲。業已證明,水過濾系統也能濃縮水源水樣中的環孢
子蟲。到目前為止,環孢子蟲的單克隆抗體還沒能制備出來。不僅
僅是因為卵囊有限,還因為卵囊細胞壁的抗原特性很弱。用包被了
凝集素WGA的磁珠來進行處理已證明是一種很有用的方法。
人們已采用了各種不同的臨床檢測方法來用于環孢子蟲的鑒定
。對環境樣品進行檢測時,自身背景熒光被證明是很有用的,盡管
這種檢測方法不具有專一性。較初用于臨床樣品分析的PCR法也適
用于食品基質;但是,其他艾美耳球蟲也可得到與環孢子蟲相同的
擴增產物?刹捎肕nll酶的限制性片段長度多態性來區分環孢子蟲
和艾美耳球蟲。利用PCR技術對環孢子蟲進行分析的較大挑戰是如
何從很少數量的卵囊中提取需要的DNA,以及如何控制出現的PCR抑
制劑。已經開展了各種各樣的研究方法,包括基質螯合、反復凍融
處理、FI'A膜與DNA提取試劑盒等o。研究者還利用不涉及抽提的基
于過濾的實驗方案來制備PCR所需要的DNA模板