落射熒光顯微鏡植物細菌細胞進行熒光測定分析
落射熒光顯微鏡能夠對從植物組織回收的大量的細菌細胞進行熒光測定分析,廣泛用于對細菌基因表達的頻率分布進行分析。
一種在共聚焦激光顯微鏡下對葉子上細菌GFP熒光進行原位測定的方法。該方法是在葉片表面上進行熒光原位雜交,首先用多聚甲醛固定葉片,然后用低濃度瓊脂薄膜覆蓋,以避免雜交過程對細菌細胞空間分布的破壞。接著透過瓊脂膜用共聚焦顯微鏡觀察標記16SrRNA的 E. herbicola細胞,測定細胞的GFP報道融合蛋白的轉錄活性通過這種方法可以測定某一特定細菌群落中基因表達的空間分布模式。 熒光蛋白DsRed的發現引起了人們的極大關注,因為在基因表達研究中DsRed有潛力與GFP一起形成轉錄融合而作為一種細菌的內在標記來應用。盡管有研究報告稱在單細胞中GFP和DsRed能夠被同時激發,但是在熒光共振能量轉移(FRET)成像中DsRed也是一個良好的受體分子(以GFP或CFP為供體)。這些熒光蛋白質之間的相互作用會干擾對熒光信號的定量分析,因此,用DsRed和GFP或其變種進行雙重標記的適用性還需要作進一步研究。
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