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落射熒光顯微鏡植物細菌細胞進行熒光測定分析




來源:yiyi
時間:2017-8-14 23:34:44

落射熒光顯微鏡植物細菌細胞進行熒光測定分析


    落射熒光顯微鏡能夠對從植物組織回收的大量的細菌細胞進行
熒光測定分析,廣泛用于對細菌基因表達的頻率分布進行分析。

一種在共聚焦激光顯微鏡下對葉子上細菌GFP熒光進行原位測定的
方法。該方法是在葉片表面上進行熒光原位雜交,首先用多聚甲醛
固定葉片,然后用低濃度瓊脂薄膜覆蓋,以避免雜交過程對細菌細
胞空間分布的破壞。接著透過瓊脂膜用共聚焦顯微鏡觀察標記16Sr
RNA的 E. herbicola細胞,測定細胞的GFP報道融合蛋白的轉錄活
性通過這種方法可以測定某一特定細菌群落中基因表達的空間分布
模式。
    熒光蛋白DsRed的發現引起了人們的極大關注,因為在基因表
達研究中DsRed有潛力與GFP一起形成轉錄融合而作為一種細菌的內
在標記來應用。盡管有研究報告稱在單細胞中GFP和DsRed能夠被同
時激發,但是在熒光共振能量轉移(FRET)成像中DsRed也是一個良
好的受體分子(以GFP或CFP為供體)。這些熒光蛋白質之間的相互作
用會干擾對熒光信號的定量分析,因此,用DsRed和GFP或其變種進
行雙重標記的適用性還需要作進一步研究。

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