生物實驗-高分子化合物的混合物電泳的應用
電泳的應用
電泳技術可以用于帶凈電荷分子的分離。低壓紙電泳已
廣泛地用于氨基酸、多膚、蛋白質、核普酸、核酸以及帶電碳水
化合物衍生物的分離。但是,小分子在紙上進行低壓電泳時
會發生明顯的擴散。對小分子要得到更好的分離,一般使用
高壓電泳,因為分離所需要的時間較短,因此分子擴散較小。
醋酸纖維素在某種程度上已取代了紙作為支持介質。高純度
的醋酸纖維素對樣品的吸附作用要比紙小,因此對樣品成分
能得到較好的分辨率。醋酸纖維素還有一個優點,即由于支
持介質染色的本底較淺,而能更好的顯示各種成分?崴崂w
維素電泳在臨床上已廣泛地用于分離血清蛋白(包括塘蛋白
和脂蛋白)和血紅蛋白,并且也用于免疫電泳。紙層和薄層高
壓電泳都能用于分離由于各種代謝紊亂而有可能以高濃度存
在于血漿和尿中的氨基酸。薄層電泳對于分離氨基酸和核昔
酸一類較小的分子特別有用,因為它分離迅速,具有好的分辨
率,并且由于它可用于雙向分離,所以可以進行蛋白質和核酸
水解物的“指紋圖譜”分析。薄層電泳也可用于胺類、茶酚類、
酚類和無機離子的分離。
凝膠作為電泳分離的支持介質,大大地擴大了這種技術
的使用范圍。聚丙烯酞胺一類凝膠的孔徑可以選擇,以促使
帶有相同電荷,但具有不同大小和形狀的分子的分離,這是一
個很大的優點。因此,凝膠電泳非常適合于核酸(特別是RNA
分子)和蛋白質(包括酶、同功酶和結構蛋白)混合物的分離。
淀粉和瓊脂凝膠的孔徑不像聚丙烯酚胺那樣熊被控制,但是,
這些凝膠已發現在分離高分子化合物的混合物中是有用的。
等電聚焦和等速電泳在分析水平上具有很好的分辨率,
但是,與幕式電泳一樣更適用于制備工作。這些技術能用于
分離較大量的物質,并且在分離結束后能回收這些物質。多
肚、蛋白質、核普酸等已用這些技術進行了成功的分離。