細胞裂解之溶質濃度細胞壁檢測生物顯微鏡
滲透裂解
細胞內的溶質濃度和膜壓力一般來說是高于外界的,當外界濃
度小于細胞內時,濃度梯度會使水流入細胞,反之亦然。只有水才
能通過膜,如果沒有支撐,細胞會因此靜水壓力引起的滲透震擾腫
脹并破裂。
大多數的微生物都不能直接被滲透震擾作用,除非細胞壁提前
經過酶作用或者在培養時抑制了細胞壁的合成。使用稀釋的緩沖液
或蒸餾水快速稀釋(10~20倍)可以有效地裂解原生質球和原生質體
,所產生的囊泡的大小取決于稀釋的速度和程度。本方法通常將樣
品離心后得到原生質體或原生質球,再加入裂解液中進行裂解凍融
法
凍融法可以提高革蘭氏陰性細胞對溶菌酶和表面活性劑的敏感
度,可用于對大批量膜或者亞細胞細胞器的分離中。
表面活性劑在細胞裂解中的應用
表面活性劑是一種既有親水性又有憎水性的兩性分子,在革蘭
氏陽性菌肽聚糖的完整性或革蘭氏陰性菌外層膜被破壞的情況下,
能夠提供較溫和的裂解方式。表面活性劑在選擇性溶解細胞質膜(
脂雙層)的同時,可以保持外層膜的完整性,細胞便隨之破壞:表
面活性劑還可以用于除去核糖體、多聚核糖體和革蘭氏陽性菌細胞
壁中的膜污染:表面活性劑可使蛋白質變性,由于染色體和質粒DN
A對機械方法中產生的流致壓力很敏感,因此表面活性劑法也是較
普遍使用的細胞裂解方法之一