涂片制備就是將一環微生物培養物涂在載玻片上
涂片
涂片(Smears)就是將一環微生物培養物涂在載玻片上,可以用
來觀察死的微生物。微生物剛放到載玻片時是活的,但經固定步驟
就將其殺死了。制作涂片常是初學者的難點。如果涂片涂得太厚,
就難以觀察單個細胞;而如果涂得太薄,就可能會找不到微生物。
如果將那滴培養物涂在載玻片上時攪得太厲害,又會破壞細胞原來
的排布。這樣,通常以四聯體形式(四個一體)存在的微生物就會被
看成是單個或成對的菌體。這常常會使初學者誤以為他們看到了多
種微生物,而事實上,它們都屬于同一種微生物。
涂片后應使其完全風干。然后將其快速通過火焰3~4次。這個
過程稱為熱固定(heat fixation)。熱固定主要有三個目的:①殺
死微生物;②使微生物黏附在載玻片上;③使菌體更容易染色。如
果載玻片還沒在完全風干,你就將其在火焰上移動,菌體就會煮沸
而被破壞。如果熱固定不夠,菌體就無法粘在載玻片上,在后續步
驟中易被沖洗掉。任何活細胞都很難著色。如果熱固定過度,微生
物將會被燒毀,你會看到被破壞的細胞和細胞殘骸。微生物的某些
結構(如莢膜),經過熱固定就會被破壞,所以應省略這一步驟,只
需通過風干使之粘附到載玻片上。