高解析低溫免疫電子顯微鏡技術培養細胞的應用
用免疫過氧化物酶方法定位培養細胞和組織的抗原
在EM水平上運用免疫過氧化物酶標記與其他方法相比較有其自
身的優點：①敏感性高；②通過PLP的固定將細胞器及其結構在形
態保存上可達到傳統的戊二醛固定樣本的要求；③方法簡單，除了
那些需要特殊包埋的樣本外，不要求特別的技術與儀器。然而，免
疫過氧化物酶標記與免疫金標記方法相比有三個重要的缺陷：①免
疫過氧化物酶標記從本身來說不能定量；②免疫過氧化物酶不能避
免潛在的DAB反應產物的擴散而遠離抗原抗體反應部位；③一般來
說，靠過氧化物酶進行免疫雙標記是不可能的。盡管過氧化物酶有
其缺陷，但此方法對細胞膜連接細胞器的分子定位非常有用。
在組織細胞內定位抗原可以提供一類有價值的數據，這類數據
可以作為用過氧化物酶標記技術在培養的細胞中獲得的即定數據的
補充(見基本方案1)。因為運用這種方法通常能檢測出大量不同類
型的細胞，所以該方法要求實驗人員能熟練操作低溫組織切片機。
運用高解析的低溫免疫金電子顯微鏡技術定位亞細胞蛋白質／
抗原，此方法可在超微水平上進行局部解剖生化的研究。
運用這種方法較常遇到的染色困難是低質量的切片，缺乏特異
性標記，背景著色深，假陽性，對比弱。差的切片通常由于標本制
備不當或冰凍切片機不穩定。非特異性標記是由于在乙醛固定之后
抗體不能識別抗原；特異性標記較理想的對照是在一類不表達目標
抗原的細胞中過表達該抗原。假陽性常常在運用雙標記時出現。在
這種情況下，金顆粒的兩側粘連在一起，之間距離小于20nm，這樣
常常被誤認為是只定位。柵格上的污點常常由試劑的磷酸化污染引
起。另外，在免疫孵育過程中切片干燥也會產生污點。
