免疫熒光熒光顯微鏡技術在細胞生物學領域的應用
免疫熒光染色技術,它可能是目前應用熒光顯微鏡較多的技術
。熒光團標記抗體可作為敏感而特異的探針,來標記固定細胞和/
或通透性細胞內的抗原,并能定位特定的蛋白質。若用不同熒光團
標記兩個或更多抗體,并用它們來染細胞的話,則同時可見多種蛋
白質的分布。本單元講述固定細胞與細胞染色的基本方法,以及發
現并解決潛在問題的技巧。
隨著選擇性標記細胞內細胞器的熒光染料的發現,熒光顯微鏡
又多了一個用途,即用來檢測活體內特定細胞分子的空間分布。用
選擇性熒光探針標記三種細胞器(內質網、高爾基復合體與線粒體)
的方法,
另一個較好的成像系統為共聚焦顯微鏡,它能收集標本內薄聚
焦面上的光線而清晰成像。
共聚焦顯微鏡在細胞生物學領域的應用;詳述如何實現共聚焦
光切片及如何重建標本的三維圖像;也談到了不同類型的共聚焦顯
微鏡系統(包括激光掃描、快速掃描及雙光子)及其優缺點,并提供
一些建議,便于該儀器的使用。
采用免疫過氧化酶法定位細胞內抗原。采用這種方法,在光學
顯微鏡及電子顯微下均能檢測蛋白質的分布,進而了解不同放大倍
數的細胞組織情況。本單元涉及一些關于確?贵w進入抗原所在的
細胞內位置、保持抗原特性以及在固定與染色過程中維持較好的細
胞形態的技巧。另外,也談到了免疫過氧化物酶染色的優缺點以及
確保其成功的操作技巧。