熒光顯微鏡設計的物鏡平面校準的特點-光學儀器
生物研究質量級顯微鏡臺,有足夠的重量能抗震(可能的情況
下放在一張防震桌
上)
正立或倒立反射熒光顯微鏡和光學設施包括:
反射照明器(n-1人工控制的中心和場光圈大小;篩選中間密度
的細縫和紅外濾
光器)
高倍物鏡頭(如60×、63×或100×)
激發濾光器,發射濾光器和雙色鏡
電子控制的遮光器
冷卻式CCD相機
計算機,帶有數字化圖像捕獲插件以及控制快門和圖像捕獲的
軟件1.顯微鏡座臺不能隨溫度熱脹冷縮,聚焦系統要求高質量,
并且能夠在長期的時延圖
像捕獲過程中固定焦點以避免人工物象。顯微鏡應該裝備高質量
的反射照明器,包括一個100W HBO的汞弧燈,一個裝有反光鏡的燈,
能夠人工調節燈泡的亮度和Koehler反射照明同軸反射中心。
物鏡頭應盡可能具有較高的分辨率,例如,配有高數
字化的光圈(1.4NA油鏡)
記住60×或者63×的鏡頭轉移光線的效率比100×的鏡頭較高
。然而,不能因
為這個優點而忽略了系統的清晰度。鏡頭不應該有形成對比的因
素,例如,能阻斷
光子傳送的相位環,還應該校準鏡頭不能產生異彩(高度消色透
鏡),并且還應該高
效傳送捕獲的光波。這些因素決定于熒光物質的選擇。關于鏡頭
光譜效率的信息掌
握在制造商手中。
當捕獲一個小標本時,不可能平場校準鏡頭(平面校準)。確實
,通常專門為外
熒光(Super Fluor-、Nikon;Fluor-或者Fluar-透鏡)設計的物
鏡不是平面校準的,
因為這種校準給透鏡增加了玻璃成分,玻璃成分越多,丟失光子
的地方越多。然而,
在一個平而寬的視場中,作者用DIC一級別平面高度消色物鏡取
得了很好的效果。