應用圖像顯微鏡觀察青霉等屬產孢結構載片培養技術
載片培養技術 在離體觀察時常用。利用此技術，真菌能在玻片上
萌發、生長，因此可觀察到各個生長時期的結構特征。這種方法是在載
玻片和蓋玻片中間夾上瓊脂培養基，真菌在這種濕的空間里生長發育。
具體做法如下：
(1)在無菌培養皿中，制備適合真菌生長的瓊脂平板，用無菌刀或
解剖針將凝固的培養基切成1 平方cm的小塊。
(2)在培養皿的底部鋪上濾紙，再在上面放一彎形玻棒，附上載玻
片和蓋玻片，消毒，然后加入無菌水使濾紙濕潤，為防止玻片上的霧氣
，可配制含5％甘油的無菌水。
(3)在無菌條件下放一塊瓊脂培養基在載玻片上。也可將熔融的培
養基用無菌吸管或移液管移1～2滴到玻片上。
(4)在瓊脂塊四個邊緣的中央接種孢子或菌絲。
(5)把消毒的蓋玻片的中部蓋在瓊脂培養基上，然后在合適的溫度
和光照條件下培養，濾紙如風干應補充無菌水。直至培養基四周開始產
孢。過早時尚未長出產孢結構，而過晚則蓋玻片上已長滿孢子，將無法
看清產孢結構。
(7)在一干凈的載玻片上加一滴乳酚棉藍，蓋上粘附有真菌生長物
的蓋玻片，制成半永久玻片，或滴一滴乳酚棉藍液到培養真菌的載玻片
中央，蓋上干凈的蓋玻片，也可在顯微鏡下觀察。制作永久玻片多用0
．1％--0．2％的淡結晶紫染色。先將載玻片過酒精燈火焰略加熱，使
產孢結構附著變牢，再滴加FAA或酒精甲醛固定2分鐘，用濾紙吸干后，
滴上染色液染0．5—1分鐘，然后在自來水下緩緩沖洗去多余的染料，
晾干后用加拿大樹膠或中性樹膠封成永久玻片。
擬青霉等屬產孢結構上往往有水散性的分生孢子長鏈，用以上染色
方法都會破壞孢子鏈。為此應將長有完整產孢結構的蓋玻片不染色、不
封片，直接觀察、繪圖或攝影，然后再染色制片。
