冷凍干燥原理是使微生物快速冷凍微生物原結構不受損
冷凍干燥保藏法
用這種方法能在穩定的狀態下保藏很長時間,就保藏方法來說
是極優越的。冷凍干燥的原理是使微生物快速冷凍,然后通過蒸發
作用,使水分直接從冰轉化為蒸汽而將水分除去。因此,在處理過
程中,微生物不是在液體中,因而能夠保持原來結構不受損害。此
法用于保藏大部分產生孢子的真菌(尤其是半知菌)效果很好,但
是對蟲霉目以及主要形成菌絲體類型的真菌則不適用,保藏期可達
數年至數十年。
冷凍干燥有專門的設備,一般是將保存的孢子懸浮在保護劑中
(血清是很好的保護劑,但是一般可用脫脂牛乳),再把少量的懸液
在無菌條件下分裝在滅菌的安瓿中,然后接在抽氣系統上,安瓿與
抽氣系統之間,一般加一干燥器,以五氧化二磷或硅膠等作干燥劑。
安瓿沉放在干冰和乙酸乙酯的混合冷凍液中,抽氣使懸浮液完全干
燥(約5—6小時),安瓿封口后在室溫下或冰箱中保存。冷凍的方
法很多,有在一40℃低溫冰箱中冷凍1小時,也可使用冰塊加食鹽
的辦法得到低溫。
菌種的恢復,是將安瓿用酒精消毒后打開,加入與冷凍前懸浮
液等量的滅菌水,靜置20一30分鐘,然后用劃線或其他方法培養。
液氮保藏法
將真菌放入一196℃的液氮中,保藏期可達很多年。其做法是把
瓊脂菌種塊投入盛有10%甘油或10%二甲亞砜保護劑的安瓿或特
制的有蓋塑料管中以每分鐘降低l℃的速度緩慢冷卻到一2 5--
一40℃后浸入液氮中快速冷卻。取出使用時應置于37℃左右的溫水
中輕輕振蕩直到冰晶完全融化(快速融化)。