用電子顯微鏡細胞中蛋白質在細胞內定位的檢測
光致交聯和熒光技術用于檢測轉運過程
利用交聯技術已確定細胞質中可與新生輸出蛋白質發生相互作
用的蛋白質組分。首先將這些研究中的輸出蛋白質進行放射性標記
,然后采用截短的mRNA技術跟蹤轉運工程
利用經透化處理的細胞檢測核運輸
經透化處理的細胞對于研究細胞溶質因子和三磷酸核苷酸在核
運輸中的必要性非常有用。用低濃度的洋地黃皂甙使細胞通透化,
質膜上發生穿孔,導致細胞組分釋放,僅留下完整的核膜和其他細
胞器。使用熒光顯微鏡,借助一種可進入通透細胞的標記蛋白來檢
測蛋白質向核內的輸入。細胞生物學技術
研究蛋白質的輸出有賴于蛋白質在細胞內定位的檢測方法。利
用電子顯微鏡可以清楚地看到真核細胞中的細胞器和囊泡。使用這
種方法時,標本被制成薄切片,在低溫下包埋在塑料中,較大限度
地減少結構的改變,并用重金屬鹽染色。此外,免疫金電子顯微鏡
被用于確定蛋白質在細胞中的位置。這種方法利用抗體對目標蛋白
質進行處理,抗體上附著有小的金顆粒。對照抗體用來與細胞器或
囊泡中的目標蛋白質反應,使其與不同大小的金顆粒相連。小的和
大的黑點代表電子顯微攝像中的金顆粒,經過比較可用來確定蛋白
質在細胞內的定位。檢測活細胞中輸出蛋白質的定位也是有益的工
作。