熒光顯微鏡的物鏡盡可能采用較大的數值孔徑NA
標本的特點為了增強熒光顯微鏡的使用效果,在設置熒光標本切片
時,應具備以下特點:
載玻片應選用能透過短波紫外光的石英玻璃。厚度約為0.8—
1.2mm。過厚的玻片吸收紫外光較多,而且對暗視場聚光鏡效果有
影響。載玻片應當光潔,無油跡,無劃痕。
蓋玻片宜采用鍍膜玻璃。一般表面鍍有氟化鎂等若干層對不同
波長的光起不同干涉作用的物質,這樣可以透過熒光而反射激發光
。反回的激發光能再次激發標本,增強熒光的能量。
標本取樣不能太厚,盡量薄一些,散開要均勻,這樣能使標本
得到充分、均勻的激發。盡量減少標本重疊,互相掩蓋,否則因激
發不均勻,影響判斷。
標本封載劑必須采用無熒光性能,無色透明的物質。通常使用
分析純甘油緩沖液,其中甘油體積90%,磷酸鹽緩沖水10%,pH值
為7.2—8.5。固定蓋玻片時,可用含量1%的明膠水,蓋上玻片
后,以10%的福爾馬林凝固。使用油鏡觀察時,注意不能使用普通
的香柏油。因為香柏油在紫外光照射下有輕微熒光效應,干涉觀察
。此時可在香柏油中拌入適量的熒光熄滅劑如硝基苯,減少香柏油
的熒光效應。有條件時,較好使用純檀香油,本身無固有熒光。用
純甘油緩沖液也可代用,但折射率略低一些,宜配用甘油浸液物鏡
。
對鏡頭的要求
為了提高熒光圖像的亮度,熒光顯微鏡的物鏡盡可能采用較大的
數值孔徑NA,同時,物鏡和高倍目鏡中,透鏡膠合不能使用加拿大
樹脂膠。因為加拿大樹脂膠主要成分冷杉樹脂在紫外線光激發下會
發生輕度的熒光效應,干擾觀察效果。所以熒光顯微鏡所用鏡頭的
透鏡膠合,一般用聚乙烯醇一類的合成膠。這種鏡頭在普通顯微鏡
均可應用。