細胞懸液培養可分為兩類:單層細胞培養和懸浮培養
細胞計數的方法:首先用0.1克分子量的枸櫞酸溶液,使細胞核
與細胞質分離,然后再用O.1%結晶紫溶液,使細胞核染色,將已
染色的細胞用生理鹽水作定量稀釋,并注入細胞計數器進行計數。
也可采用不染色直接注入細胞計數器中計數。為了增加計數的準確
性,計數前必須攪動懸液菠細胞分布均勻;在懸液注入計數器時,
不要用力太大,只須從吸管中輕輕地擠出一滴懸液,依靠毛潮管的
吸力,使懸液流入計數器。計數時,在低倍顯微鏡下數出四焦姻天
誨中的細胞數,僅計算有胞漿和胞核的完整細胞數,根據以下方程
式,算出每毫升懸液中的細胞數
如果稀釋細胞的懸液并非l毫升,只須將細胞數/毫升再乘以
懸液毫升數,即得懸液中的細胞總數。
由于染色的細胞核看起來比較清楚,而且可以區別出正常健康
的細胞核和早期壞死階段的細胞核,為了計數的準確性,還是采用
染色計數的方法為好。(近代電子細胞計數器已逐步代替了細胞計
數器的計數方法)。
懸液培養法
細胞懸液培養法可分為兩類:一類是單層細胞培養,或稱定量
培養。細胞在這種培養里雖然是用懸液狀態接種于培養瓶內,但接
種后細胞立即沉入瓶底,固著干玻璃底面進行增殖。因此,這種培
養實際上還是一種靜止狀態的培養。另一類是懸浮培養,它是一種
活動狀態的培養,即通過一種特殊的裝置,使懸液不停地滾動,細
胞在培養液中始終保持懸浮的狀態。這種培養法可使細胞大量的繁
殖,獲得大量的細胞。今僅介紹單層細胞培養法。
單層細胞培養:單層細胞培養,多用于不同實驗條件下細胞的
定量測定和病毒的研究上。
單層細胞培養,其細胞的來源有兩種,一種可先通過母培養,
即先經過組織塊的培養而獲得細胞懸液,再進行單層細胞培養。另
一種來源是利用胰蛋白酶或其他酶的消化作用,直接把新鮮組織的
細胞間質破壞,使細胞分散成游離細胞,再制成細胞懸液進行單層
細胞培養。一般經過母培養的方法比較容易成功,而用組織直接消
化的方法是比較難以成功的。今以免腎為側,說明單層細施培養的
過程。