色譜的基本原理-樹脂(固定相)材料研究實驗顯微鏡
色譜法
色譜法是許多純化方案的核心并擁有一些共同的特征。首先，目的
蛋白溶解在流動相里，通常是緩沖水溶液中。溶液通常來源于細胞提取
物并且可以直接用于色譜分離。當流動相通過樹脂(固定相)時，根據蛋
白質功能基團及物理性質的不同，固定相可以選擇性的吸附分子。物理
性質包括電荷、分子質量、疏水性和配體親和力。固定相的選擇與純化
的蛋白質性質密切相關。
色譜的基本原理是一根柱子，柱子中填充樹脂，上樣之前用緩沖液
來平衡樹脂。樣品進入柱子，依賴蛋白質和樹脂上的功能基團之間的相
互作用的不同來分離。這些相互作用會降低一種或幾種蛋白質通過柱子
的時間，而其他蛋白質不受阻礙。這樣速度較快的通過柱子的蛋白質就
和其他剩余的蛋白質分離開來。有些時候蛋白質混合物與功能基團的相
互作用不同，強的相互作用使其流過柱子的速度變慢，弱的相互作用使
其稍微快一些，而沒有相互作用使其流過樹脂毫無阻力。
蛋白質溶液在流動相和固定相之間平衡伴隨著溶液以階梯式從塔板
到塔板在柱子中流過。柱子的分辨率會隨著理論塔板數的增加而增加，
實際上，有很多增加理論塔板數的方法，如增加柱子的長度，減小填料
顆粒的尺寸。增加分辨率的值是為了使兩種相似的流動的溶質以合理的
效率分開。
