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酶的制備實驗-層析是純化酶時常要經過的步驟




來源:yiyi
時間:2016-8-30 20:55:37

酶的制備實驗-層析是純化酶時常要經過的步驟


     制酶的實際操作方法與設備儀器一發生故障,即無法再繼續
操作。切記手續能簡則簡,別無他法時,再改用比較復雜的方法。
  
     基本設備、特殊材料與試劑  測定酶活性少不了一臺紫外可
見分光光度計,較好再聯上一臺記錄儀,用以記錄某段時間內酶反
應的過程。如果由于反應量過少或其他原因,用分光光度計無法測
量或測不準的時候,就要利用放射性同位素的高度靈敏性,在酶反
應的過程中混入某種放射性同位素,再用閃爍計數器
    測出反應的結果。
    酶的制備常免不了要離心分離。固然在工業上分離沉淀總是用
過濾的方法,但是在實驗室里則以離心分離比較簡便好用。離心分
離機以能使轉室溫度保持在0℃以下,轉速能達每分鐘二萬轉者較常
用到,大小各式轉頭較好具備。
    柱層析是純化酶時常要經過的步驟。雖然在實驗室中用普通玻
璃管、滴定管、甚至注射器就可以制成層析柱,而分離出來的液體
也可以人工分部收集(Fraction—collecting),再用分光光度計逐
個試管去測定活性。但是如果能有一套設備,其中包括幾支大小長
短不同的層析柱,一臺自動分部收集器(Fractioncollector),并
配有一部紫外監測儀(uvmonitor),一臺蠕動泵(Peristalticpump)
,和一具梯度混合器(Gradientmixer),則使用起來極為方便省時
。這樣的一套設備所值和分光光度計相仿,現以瑞典Pharmacia—L
KB公司的出品較為人所樂用。
    因為由生物體中提取酶要先將細胞破壞,所.以攪碎器(Blend
er)和勻漿器(Homogenizer)都是酶實驗室常要用到的工具。其他如
精密天平、復電極pH計、攪拌器、制冰機等也都是一般生物化學實
驗室所必需有的設備

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