紙上層析分離鑒定微量氨基酸分析鑒定顯微鏡
氨基酸的分離和分析鑒定
蛋白質中氨基酸種類很多，為了研究蛋白質的組成和結構，以
及制備和鑒定的需要，必須進行氨基酸的分離和分析鑒定工作。常
用的方法很多，其中紙上層析和薄層層析法常用于氨基酸的分析鑒
定方面，離子交換法常用于氨基酸的分離制備和定量測定方面。此
外也常應用等電點、溶解度以及與專一試劑作用等方法來分離制備
某些氨基酸。在分析鑒定上還有微生物法、酶化學法以及根據某些
氨基酸的特殊基團的顯色反應等。本節重點介紹紙上層析法和離子
交換法。
紙上層析法
紙上層析是分離鑒定微量氨基酸較簡易有效的方法，一張濾紙，
幾十毫升溶劑，就可把僅有幾個微克的混合氨基酸分開，并加以鑒
定，既可作微量分離，又可作定性分析和定量測定。此法不僅應用
于氨基酸，也廣泛用在糖、核苷酸、有機酸、抗菌素等的分離鑒定
上。
具體操作時，先將樣品點在濾紙一端距紙邊約2～3厘米處，然
后將點有樣品的一端浸入某一有機溶劑系統中，經毛細管作用使溶
劑從紙的一端流向另一端，樣品中的混合物也得以分離，濾紙干后
再以適當顯色劑或在紫外燈下觀察所得的層析圖譜，加以鑒定
紙上層析一般屬于分配層桁，它白g基本原理主要是根據被分
析的樣品在二種不相混合的溶劑系統中的分配系數(即在二相中濃
度比值)不同而達薊分離的目的，相當于一個連續的反向液液抽提
過程。紙上層析就是根據這原理，把一種溶劑固定在固體的支撐物
上，稱固定相，由于濾紙纖維對水有較強的親和力，一般能吸著22
％左右的水分，因此濾紙就是含有，固定相水的惰性支撐物，另一
飽和了水的有機溶劑相(如飽和酚水、正丁醇一乙酸一水)為流動相
，當流動相從含有氨基酸樣品的濾紙上流過時，各種氨基酸就在這
固定相和流動相之間連續不斷的抽提分配，根據各種氨基酸在這三
相中的分配系數不同，在紙上移動的速率也不同，當流動的溶劑移
動到一定的前沿后，各種氨基酸就分別集中在濾紙的不同部位而被
分開。
