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原生質體培養技術有多種較常用固體平板方法




來源:yiyi
時間:2016-7-31 3:01:42

原生質體培養技術有多種較常用固體平板方法


    酶解后可將材料經過一個有合適孔徑的不銹鋼網或尼龍布過濾
和離心以除去酶液。碎片和細胞。未消化的組織,然后再加新的滲
透壓穩定液或培養液和反復離心以洗凈酶液和碎片,也可以采用漂
浮法、兩相法等進行原生質體純化,制備出的原生質懸浮液應取樣
在顯微鏡下檢查,或用低滲溶液觀察是否破裂,

   較好是用熒光增白劑來鑒定脫壁的效果。如仍有殘存的細胞壁
則在紫外光照射下鏡檢可見到熒光,如果是原生質體則沒有熒光。
然后再取樣測定原生質體的活力,可用活體染色、觀察有無胞質環
流,測定光合作用。  呼吸作用等、較好的方法是用熒光雙醋酸酯
(FDA)染色

原生質體培養方法
    原生質體的培養方法有多種。較常用的是固體平板法,簡易方
便又可定點觀察。其他如懸滴培養、液體淺層培養。雙層培養(液
體/固體。固體/固體)、x平板培養、固體小塊培養、混合培養等
都可根據試驗需要選擇采用,原生質體的培養基通常是參考細胞或
組織培養的培養基修改而來,主要的差異是:原生質體培養基中需
加有一定量的滲透壓穩定劑,生長素和激動素或其他植物激素的種
類和濃度也可參考細胞或組織培養的培養基而修改:有的植物材料
,雖然參考其細胞或組織培養基而設計出了原生質體培養基也不能
解決問題,原因有待探尋。

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