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生物物理工具熒光顯微鏡技術在細胞生物學應用
免疫熒光技術不僅可以獲得定性和半定量的數據，而幾也
是一種用來對細胞內某組分進行準確定量的很敏感的方法。無
論是從普通顯微鏡還是從共聚焦顯微鏡獲得的熒光影像均可進
行數字化，然后在計算機上用圖像分析軟件處理。電子圖像的
獲得和分析是一個發展很快的領域，
。熒光顯微鏡技術具有較高靈敏性和專一性，因此是直接由
于研究活細胞內特定組分的極難得的生物物理工具。
抗體
免疫熒光法要求杭體必須能夠在其他分子濃度很高時專一
地識別抗原分子。在多克隆抗血清中因含有多種不同的抗體，
它們可以與同一種抗原的多個抗原決定部位結合，因此，多克
隆抗血清雖然通常能很好地染色細胞，但是常常存在著高濃度
的非專一性抗體，因此會產生很強的背景。在多數情況下，抗
血清的簡單滴定使偽信號減低到檢測水平以下，從而消除這一
問題�？寡宓男盘枏姸仁侵苯拥匾蕾囉诳剐莸臐舛炔⒑涂剐�
的親和常數有關:親和性越強，有效稀釋度越高。如果滴定不
足，在使用前，以固定的細胞預吸附抗血清，事實上，稀釋數
倍后也可以獲得較清楚的信號。除此之外另一個常用于多克隆
抗體的方法是抗體的免疫親和純化，也可以降低非專一性的染
色
或者組織培養的上清液和腹水或者兩者的混合物都可以使
用作為單克隆抗體，由于一般認為單一抗體是在沒有競爭的情
況下與抗原結合的，因此總的說來使用單抗會增強信號強度，
雖然單克隆抗體通常能給出清晰的信號，但是某些單克隆抗體
在細胞染色時卻不呈反應，這可能是由于下列事實所造成的，
即細胞中的特異性抗原決定簇被掩蓋了或者是在細胞固定期間
被破壞之故。
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