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細胞直接計數-通過顯微鏡對每個方格中細胞計數




來源:yiyi
時間:2016-12-20 14:50:04

細胞直接計數-通過顯微鏡對每個方格中細胞計數

細胞濃度的定量

  培養基中細胞濃度的定量對于微生物生長動力學和計量學的確定有
著至關重要的作用。細胞濃度量化的方法可分為兩類:直接法和間接法
。在許多情況下,由于培養基中懸浮的固體或者其他干擾物質的存在,
不能采用直接法。測量細胞的數量還是測量細胞的質量取決于所需信息
的類型和體系的性質。當只需測一種濃度時,通常優先選擇測細胞質量
濃度,但通常希望兩種濃度都測量。

  細胞數量濃度的測定

  Petroff—Hausser載玻片或血細胞計數器常用于細胞的直接計數。
在這種方法中,經校準的方格置于培養室的上方,通過顯微鏡對每個方
格中的細胞進行計數。為了進行可靠的統計,至少要對20個方格的細胞
進行計數并取平均值。培養基必須清潔且無顆粒,因為顆粒會遮蔽細胞
或與細胞混淆?梢酝ㄟ^染色區分死細胞與活細胞。這種方法適合非聚
集的培養。由于具有形成菌絲體的特性,這種方法難以用于霉菌的計數

  含有適當培養基的瓊脂凝膠平板(培養皿)用于活細胞的計數(本文
中“活”的意思是指具有繁殖能力)。培養樣品稀釋后涂布于瓊脂表面
,進而對這些平板進行培養。在培養期瓊脂表面的菌落進行計數。結果
用菌落形成單位表示。如果細胞形成聚集體,那么一個單菌落就可能不
是由單個細胞形成的。這種平板計數法更適合于細菌和酵母菌的計數,
但不太適合霉菌的計數。必須對大量的菌落進行計數才能得到統計學上
可靠的結果。由于一些培養基比另一些培養基更有利于生長,因此必須
仔細選擇培養基;罴毎麛悼赡茏兓,這取決于培養基的組成。從單個
細胞開始,可能需要繁殖25代才能形成一個容易觀察的菌落。除非選擇
合適的培養基和培養條件,否則即使有代謝活力的細胞也可能不形成菌
落。

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