光學顯微鏡-不同的化合物染色來增強對比度
早期使用顯微鏡觀察的樣品通常是活的,或者說至少短時間是
活的。固定和染色技術隨著顯微鏡的進步而發展。由于顯微鏡光學
的改進,光學系統的局限性確定了樣品制備的必要性。顯微鏡研究
者根據光學的局限性作出了適當的讓步。放大、數值孔徑值、分變
率限度、工作距離和色彩偏差糾正被認作為相關因素。另外,各種
照明方法包括亮視野、暗視野、相差和熒光相繼被引入主流顯微鏡
。隨著這些類型顯微鏡的利用,人們接受了這樣一個事實:即樣品
需要制備成能滿足顯微鏡光學局限的要求。通常大多數這些的制備
需要固定樣品。
用相機與顯微鏡結合使用來證實影像。常規的膠片照相顯微鏡
適用于大多數亮視野、暗視野和熒光顯像,因為曝光時間易于滿足
。在有必需特殊設備的實驗室將活細胞制成膠片,這些膠片的大多
數使用亮視野方式制成,因為膠片的顯影需要較大光強度,由于染
料的毒性和長時間曝光的光毒作用,不可能制成活細胞熒光膠片。
雖然與存活樣品相比,固定的細胞產生的信息較少,但也有一
些優點。固定的細胞更扁平,持續時間更長,它們不能運動,也不
需要持續的飼養,能用不同的化合物染色來選擇性地增強對比度。
大多數抗褪色溶劑與固定細胞(但不是活細胞)是相容的
當活細胞的影像被記錄在常規膠片上時,顯微鏡工作者被膠片
的敏感度和分辨率所限定,同時也限定了實驗的種類。,當與現代
的、增強的或冷的電荷偶聯裝置(ch辨coupled device,CCD)攝像
機和光電倍增管掃描技術相比時,膠片有許多局限性。因此,早期
活細胞池受到了相關技術固有地限定。早期的顯微鏡并沒有現代顯
微鏡的圖像對比