微粒體細胞超微結構透射式電子顯微鏡
常用于細胞特異物質(如抗原)的定位,方法是將細胞與鐵蛋白標記
的抗體共同孵育,然后經染色、包埋、超薄切片,在透射電鏡下鐵
蛋白形成高電子密度顆粒,可以精確地、特異性地顯示出相應抗原
的部位、分布。用鐵蛋白標記配體,還可研究、顯示膜受體。但由
于鐵標記較單一,現已不常用。在金屬標記中現用得較多的是膠體
金標記。膠體金標記技術是顯示細胞中某種特殊物質結構的技術,
膠體金為一種帶負電荷的疏水膠體溶液,由吸附的周圍離子云維持
膠體的穩定性。膠體金標記有直接法和問接法兩種,直接法是金標
記物直接標記細胞結構;間接法是標本先用第一抗體血清處理后,
再用金標蛋白A或金標第二抗血清處理。蛋白A(protein A)是從金
黃色葡萄球菌分離出來的一種蛋白質,具有結合免疫球蛋白的功能
。膠體金標記可用于光鏡,也可用于電鏡,包括透射式電鏡和掃描
電鏡。
細胞離體成分的分析是將細胞破碎,取其某種細胞器或針對某
一化學成分進行分析。例如,破碎細胞通過梯度離心分離線粒體,
在體外可測定ATP的合成及分解功能。細胞中的內質網經分離出細
胞后可形成囊泡,稱為微粒體,其中包括各種酶成分,對這些酶成
分的分析有利于對內質網功能的研究。對細胞化學成分的分析方法
很多,如蛋白質分析就有層析法、SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳等。層
析法又有多種,常用的有柱層析,方法是使蛋白質混合液通過含有
多孔固體基質的柱,不同的蛋白質與基質相互作用而被不同程度的
滯留,當其從柱底流出時,即可被分別收集。選擇不同的基質,就
可根據蛋白質的電荷、分子量大小或特殊化學基團的結合力而分離
出不同生物活性的蛋白質。sDS聚丙烯酰胺凝膠電泳是一種常用的
方法,SDS為帶負電荷的去垢劑,即十二烷基硫酸鈉。它可以使蛋
白質展開成為伸展的多肽鏈,并與其他蛋白質或脂質失去聯系。這
樣在聚丙烯酰胺凝膠中進行電泳,就可使復雜的蛋白質混合物被分
離成一系列按分子量大小依次排列的區帶,很容易進行鑒別分析。
細胞器的分離和提純是為了更好地研究細胞超微結構的化學組成和
生命活動。細胞器的分離常采用差速離心法,即首先將細胞破碎,
然后在低溫和適當pH條件下用不同轉速的離心機將細胞的各種成分
分開。如低速(1000r/min)短時間(15min)離心可首先將較大的細
胞核沉淀下來,用高速(8000~25000r/min)離心可使次大的線粒
體分離,再用超速(25000~8500°F/min)離心,可收集溶酶體等
封閉小泡以及核糖體。差速離心不易得到純凈的細胞器和組分,其
中;煊心ず鸵恍╊w粒結構。