顯微分光光度計在顯微鏡上附加光度測量系統
顯微分光光度計則采用了雙波長細胞光度測量法,可在顯微鏡
下對單個細胞微細結構中的核酸、蛋白質、酶、糖原等化學物質進
行形態學定性定位觀察,又可進行定量測定。該儀器具有作透射光
照明的吸收光測量、落射光照明的熒光和反射光測量及熒光光譜分
析等多種定性定量測定功能。一般采用二波長一測量場法,也可采
用一波長二測量場法或單束光掃描測量法測定細胞化學反應后被測
物質的相對含量,由計算機程控,對各測量點的透光強度值進行處
理,并進行消光值計算和分析,打印出細胞化學反應產物的光密度
值(O.D)、光密度分布直方圖、樣品的數字圖形及各種信息的分析
結果。但顯微分光光度計價格昂貴,功能較少,目前應用不多。
用于吸收細胞光度測量的商品儀器,用于掃描和集成顯微密度
測量。有的通常在顯微鏡上附加一個光度測量系統作為測量儀器。
有一種顯微測密度計(microdensitometer)也可測量細胞化學反應(
如DNA的Feulgen反應)的密度,以確定DNA等物質的含量。
又如掃描顯微鏡光度計系統是由一架標準顯微鏡和兩臺光度計
組成。這些儀器由于價格及用于細胞化學反應的定量測定有一定的
局限性,尚未得到廣泛的推廣應用。
微熒光測量(microfluorimetry)
熒光測量法,只能用于細胞化學中的熒光反應較終產物。該法
靈敏度較高,特異性可通過選擇適當的激發波長和發射測定波長而
獲得。
顯微鏡不可分辨的小顆粒,用熒光可以測定,且無分布性誤差
,因此可以用單個測量點代替大面積測量,從而節省許多時間。用
落射光可測量不透明的或厚的標本。但熒光測量的實際應用還是有
限,能進行熒光反應的物質及建立恰當的標準物尚