動物細胞不同蔗糖梯度實驗圖像高倍顯微鏡
從胞漿蛋白中分離膜囊泡
實驗中常常需要確定蛋白質是定位于胞漿中還是胞膜上,除此
以外,在對透化處理的哺乳動物細胞所進行的實驗以及有囊泡出芽
形成參與的實驗中,對膜和胞漿進行分離也常常是很有必要的。將
膜與胞漿分離的策略包括使膜透過碘克沙醇阻滯液而從大密度樣品
中懸浮出來,此策略已擴大用于真核生物和細菌。因為蛋白遠比膜
的密度大,它不會在梯度中漂浮而是會沉淀,所以此策略可以使二
者得到較大程度的分離。這種分離方法能避免從蔗糖梯度結果所得
出的任何含糊結論,因為在蔗糖梯度中由于沉降作用和擴散作用,
膜沉淀和蛋白質會慢速地向同一方向移動。在碘克沙醇溶液中蛋白
質與膜囊的密度之間的差異也會比在蔗糖溶液中大更多,主要是由
于碘克沙醇梯度具有更低滲透濃度。類似的方法也用于從高密度脂
蛋白中分離脂質體。
內吞作用
配體標記
在大多數情況下,對內吞過程所進行的跟蹤是通過配體來完成
的,配體可以使用放射性標記,可以較終通過作用底物而檢測的共
價結合酶,或者膠體金來進行確定。除非配體自身就很容易被確定
,否則對配體所進行的這些修飾可能會改變它的化學行為,但這也
是很難避免的。這種方法的基本策略是將這些標記的配體在短時間
內注入組織或細胞,之后便可以對配體在不同胞內部件的活動進行
跟蹤。