共聚焦顯微鏡,密度梯度常用于分析細胞信號轉導過程
共聚焦顯微鏡,密度梯度經常用于分析跨膜運輸和細胞信號
轉導的過程。這些過程是與廣泛的細胞活動相關的,例如分泌、生
物合成、內吞作用和病毒處理。密度梯度不僅用于分級分離主要的
亞細胞器,如光面內質網、粗面內質網和高爾基體,也用于分離亞
區室、反式高爾基網絡、內質網一高爾基中間體、早期和晚期內體
、轉運和分泌小泡以及膜小凹和脂筏等質膜結構。這一細胞生物學
研究的豐富領域也包括蛋白從胞漿向膜的轉運,這個過程可能發生
在細胞分化過程中。
常常用于梯度分析的上樣液是來自于簡單除細胞核的上清液,而不
是如輕線粒體沉淀或是微粒體那樣的已經部分純化的成分。由于梯
度法不經常用于純化一種特殊類型的膜,而是用于分析蛋白質或其
他分子從一個區室到另一個區室的易位過程,更重要的考慮是沒有
任何潛在涉及的區室在梯度分離前的處理中丟失。像這樣簡單處理
的勻漿也可以減少實驗所需的時間,并將操作次數減少到較小。
許多年來,蔗糖梯度是用來分析這些膜區室的主要方法,這章
將會討論很多使用蔗糖作為介質的成熟實驗方案。然而碘化的密度
梯度介質,特別是Nycodenz@和碘克沙醇也逐漸地被用來實現這一
目的,這一章也會給出許多使用這些梯度介質的例子。與蔗糖相比
,這些介質有許多優點:作為密度介質,它們容易購買到,也容易
配制梯度溶液,而且與相似密度的蔗糖相比,它們的摩爾滲透壓濃
度更低(特別是碘克沙醇溶液),使得這些溶液的分辨能力比蔗糖溶
液的更高。