生物熒光-熒光素酶分析經常用于檢測ATP量
生物熒光
生物熒光是激發態時生物分子發出可被測定熒光的過程,這個
過程可被用來測定微生物代謝產物中ATP的量。理論上,測定ATP的
量可以反映活細胞數量,因為活細胞數越多,產生的ATP量越多。
單個酵母細胞產生的ATP量要多于單個細菌細胞產生的量,因此對
酵母的檢出限可以低至10個細胞。
熒光素一熒光素酶分析經常用于檢測ATP的量,因此熒光素一
熒光素酶生物熒光技術已越來越多地替代傳統消毒和平板計數法來
檢測無菌程度,F在,又有一些生物熒光檢測試劑盒投放市場。只
要購買檢測器后,每次測試只需包括樣品收集容器、消毒和其他試
劑的費用,價格便宜。雖然該方法已被應用于酒精類和非酒精類飲
料的生產中,但是通過檢測ATP的量來推算活細胞的量存在一個很
大的弊端。微生物種類不同以及同種微生物所處的生理狀態不同(
如受傷狀態、饑餓狀態等),ATP的產生量相差很大。而且,該方法
不能分辨由酵母或是別的微生物產生的ATP,使實驗結果難以詮釋
。比濁法和光密度
一直以來,分光光度計與濁度測定儀被微生物學家用來快速檢
測細胞密度和特定化合物濃度(如顏色、蘋果酸等)。分光光度計是
檢測光通過某種樣品溶液后被吸收或是通過的光強度,濁度測定儀
測定的是光的散射程度。
分光光度計接收通過的光(420nm或者650nm)與光源處在同一條
直線上,而濁度測定時需與光源垂直。要事先繪制好吸光值和細胞
密度或其他一些參數的標準曲線,才可以通過測定吸光值推算出未
知樣品的細胞密度等。因此一個成功的應用就是需要用其他計數方
法來校正吸光度,較常用的就是直接平板計數法。