熒光分光光度計的組成結構和使用熒光分析的方法
熒光分光光度計
熒光分光光度計亦由光源，單色器、液槽和受光器組
成。與分光光度計不同，它有兩個單色器，一為激發光單色器，
一為熒光單色器
高壓汞燈在使用過程中不可關閉電源，如在使用過程中汞燈熄滅，必須等待
汞燈完全冷卻后，才可以重新接上電源。
氙弧燈所發出的光強度大，且是連續譜線，包括
250—700nm光域。而且在300—400nm整個波段內，所有的
射線強度幾乎相等。
2．單色器：在熒光分光光度計中液槽前裝一個單色器，
以得到一定波長的激發光，在液槽底部恰好與前一單色器垂
直方向另裝一個單色器以得到一定波長的熒光。單色器用光
柵或石英棱鏡做成，光柵造價低而靈敏度高。
3．受光器：熒光分光光度計需用光電培增管為受光器，因
通過光柵或棱鏡的單波長熒光很弱，硒光電池難以測量。
4．液槽：熒光計中液槽要用低熒光材料制成，通常用石
英。液槽形狀以正方形或長方形為宜。因為這類形狀的液槽散
射光的干擾較小。低溫熒光分析所用液槽是在石英液槽之外
套上一個盛液氮的透明的石英外殼。
5．熒光分光光度計的光學系統：
熒光分光光度計的光學系統。該儀器激發光單色器和熒光
單色器都采用雙色單色器，以提高分辨本領和降低散射光的
干擾。該儀器的激發光單色器系用一個石英棱鏡配上一個光
柵，熒光單色器則采用兩個光柵。光柵刻線均為600條／毫
米。激發光單色器及熒光單色器的分辨率為0．5和0．2nm，色
散分別為7．5及2.7．nm／mm。光源為500氙燈，用濾光片濾
去在200—800nm區的高次反射光。
熒光分析的工作方法
一、標準曲線法：用一系列熒光物質的標準溶液在一定
條件下測其熒光強度，然后以熒光強度對濃度繪制標準曲
線。在相同條件下測定試液的熒光強度，從標準曲線找出試
液熒光物質的濃度。
繪制標準曲線時，需用標準系列中濃度較大者為基準校
準熒光強度為100，用空白溶液調節讀數為零。為了使不同時
間所繪制的標準曲線一致，每次均采用同一基準镕液進行校
準。
二、差示法：在分光光度法中當試液濃度太大吸光度讀
數高于0．8時，必須采用差示法。所謂差示法就是配制一系
列標準溶液并把試液濃度包括在其中。用一個濃度較小的標
準溶液， (相當于平時的空白溶液)將儀表讀數調至100，以
濃度較小的標準溶液為原點，繪制標準曲線。然后測量試液
的吸光度，從標準曲線找出試液濃度。
在差示熒光法中，則是先用一個比試液熒光強度較小的
標準溶液(例如濃度為1微克／毫升)調節熒光強度讀數為
0，再用另一熒光強度比試液大的標準溶液(例如濃度為
2微克／毫升)調節熒光強度讀數為100。這樣可使測定在
1—2微克／毫升下進行。
