熒光技術在顯微鏡的應用-熒光光譜的的原理
物質受紫外光照射時發出各種顏色和不同強度的可見
光，但當紫外光停止照射，光又隨之消失，這種光叫做熒
光。熒光分析法是用熒光分光光度計測出與熒光物質濃度成
線性關系的熒光強度的一種分析方法。
吸收光譜與熒光光譜
讓不同波長的紫外光照射熒光物質溶液，測其相應吸光
度，用吸光度對波長繪制的曲線即熒光物質的吸收光譜。熒
光分析中所用的激發光是該物質吸收光譜中某個吸收峰所在
波長的光。當激發光的波長和強度保持不變，轉動單色器在
不同波長下測定熒光物質所發出的熒光強度，以熒光強度對
波長作圖，則得該物質的熒光光譜。熒光物質的吸收光譜與
熒光光譜存在著“鏡象對稱”關系
物質發生熒光，主要決定于其結構，其次是要有高的熒
光效率。熒光效率是發出熒光的量子數與吸收激發光的量子
數之比。許多吸光物質并不發生熒光，就是由于它們的熒光
效率低，而將所吸收的能量消耗予與溶劑分子或其他溶質分
子之間的相互碰撞的緣故。
影響熒光強度的因素：
1．同一種熒光物質在不同溶劑中熒光光譜位置和強度要
發生變化。一般熒光峰波長隨溶劑介電常數的增大而增大：
熒光強度隨溶劑增大而增強。
2．溫度對溶液的熒光強度有明顯影響。一般溫度降低熒
光效率升高，熒光強度增大。因溫度降低，介質的粘度逐漸
增大，熒光物質分子與溶劑分子的碰撞也隨之減弱的緣故�！�
可見低溫熒光分析可大大提高靈敏度。
3．有些熒光物質在激發光長時間照射下，容易發生光
解，從而使熒光降低。為此測定時應盡量縮短照射時間。
4．溶液的PH對熒光強度有顯著影響。熒光物質往往是
弱有機酸或有機鹼，其分子量負離子經常是結構不同的互變
異構體，其中一個常是非熒光物質。
