環境試樣如海水或飲用水中只有少量的細菌-計量顯微鏡
例如，光偏振會導致分子雙折射(molecular birefringence)。長的或平的分
子，尤其是聚合大分子，可以清楚地顯現出分子雙折射，分子雙折射特別適合于
檢測微生物產生的胞外聚合物。在分子雙折射中，當偏振光遇到一系列鏈狀排列
的原子偶極，如在長分子中，偶極力引起光沿著鏈的縱向振動，在兩極處產生了
更大的極性各向異性。然而，分子中的側鏈趨向于減少分子主鏈中的雙折射強
度，使極性各向異性減小。樣品中呈現的各向異性的模式和強度可指示樣品的純
度和元素結構。
樣品對偏振光效應的分辨率依賴于通過偏光器產生平面偏振光以及用檢光器
檢測效果。在偏光顯微鏡中使用兩種偏光器:偏光鏡和檢光鏡。偏光鏡傳遞光，
置于光源與鏡臺下部的聚光透鏡之間;檢光鏡置于物鏡和目鏡之間。許多偏光器
使用偏振膜制造，如位于兩個保護性的薄玻璃片之間的人造偏光板。當來自第一
個偏光鏡的偏振光，在允許其通過檢光鏡的方向振動時，顯微鏡的視野將變黑，
因為偏光鏡光振動的方向是交叉的。這樣，在偏光顯微鏡中，對比度
是整個樣品多種干涉現象的結果。晶體中每一點的光干涉和延遲會產生在黑色背
景中的對比度和顏色。Michel-levy干涉光譜基于光通過不同厚度的樣品的光延
遲，根據Michel-levy干涉光譜，光干涉可產生一級灰色、高級白色和彩色的樣
品影像。
稀釋步驟
提取步驟之后，通過樣品的一系列稀釋把微生物分成若干單獨的再生單元。
無菌水、生理鹽水、蛋白陳或磷酸鹽緩沖溶液是稀釋過程中常用的幾種溶劑。盡
管水很方便，也常常被使用，但在稀釋過程中它不是首選溶劑，因為水不能防止
稀釋過程中的滲透壓沖擊(osmotic shock).
水樣的濃縮步驟
在一些環境試樣如海水或飲用水中只有少量的細菌，因而在計數前需采用濃
縮而不是稀釋。在此方法中，用真空裝置使特定體積的水通過
膜過濾。這樣，細菌就被截留在膜上，有細菌的膜然后被放在瓊脂培養基或者浸
泡過培養基的纖維墊上，使其長成單個的菌落，這就是膜過濾技術的基礎
為了達到分離和計數的目的，在膜上獲得合適濃度的細菌，常常需要過濾不同
體積的水。在這種情況下，選擇適合于細菌收集的膜類型和大小是至關重要的，
經常使用網眼為0.45μm的硝化纖維素濾膜。在處理試樣的過程中，必須注意
處理時間、真空壓、干燥等因素，務必使生物承受的壓迫降至較小。
