熒光顯微鏡與普通透射光吸收研究用顯微鏡的區別
熒光顯微鏡技術:光學系統
發射光的波長要長于激發光的波長,是熒光顯微鏡光學系統的基礎
這種顯微鏡與普通透射光吸收研究用的顯微鏡的區別是有兩個濾片。一個初級(激發)
濾片置于光源和標本之間。這個濾片與所用光源組合在一起,提供一個相當波段的光,
這光的波長與被研究的熒光色素的激發波峰相適應。另一個濾片即第二濾片或屏蔽濾
片,它只是為了防止激發波長光進入觀察者的眼,置于物鏡和眼之間。在所使用的激發
光范圍內,其透光度應該盡可能低,而在熒光色素發射光譜區域內,其透光度應盡可能
熒光染色術(fluorochromy)
用于染色的熒光染料稱為熒光色素以區別子那些專用予透射
光觀察的透光色素(diachrome)。許多染料既可用為透光色素又可用為熒光色素。例
如剛果紅、伊紅、鹼性品紅(對玫苯胺)。大多數黃、橙和紅色染料實際上具有熒光,就
這些染料而論,熒光顯微鏡術只是顯示染料的另外一種方法,它的應用不會改變染色的
特性。使用強熒光料,由于較低濃度的染料便可被觀察到,因而增加了染色反應的靈敏
度。然而一個標本染色很深的區域,由于濃縮熄滅,可以只呈現微弱的熒光,除非使用
落射照明。由于這個原因,通常用于熒光染色的染液,比透光染色要稀得多。一個典型
的熒光色素染液,其濃度是1:10,000,有時使用更稀的溶液。
用熒光顯微鏡術檢查一個染色反應的結果,可有兩個特殊的優點5首先擴大了可用
染料的范圍,包括那些有熒光,但是在可見區域無色,或只是淺染的染料。這類熒光色
素的代表是硫黃T和BA0。熒光顯微鏡術第二個優點是,這種方法
較通常的吸收顯微鏡術,能顯示更少兩的燃料