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光學顯微鏡分辨率,干燥系物鏡數值孔徑通常小于1




來源:yiyi
時間:2015-11-11 22:59:39

光學顯微鏡分辨率,干燥系物鏡數值孔徑通常小于1


光學和電子顯微技術

光學顯微鏡分辨率

膠體質點由于線度太小而不能直接用顯微鏡觀察.光學顯
微鏡的分辨率:即兩個物象能分別清楚地辨別而不混為一體的
較小距離)主要受照明光波長的限制.

光學顯微鏡的干燥物鏡數值孔徑通常小于1.油鏡頭在光波波長為
600nm時,其數值孔徑可達1.5,這時分辨率的極限為200nm
(1.2μm)’左右.由于人眼能容易地區分兩個相距約0.2mm(200
μm)的物體,所以,即使用構造良好的、放大率超過1000倍的
光學顯微鏡也沒有什么好處.因為放大更多的倍數只能增加圖
象的大小而不增加其清晰度

    由于其數值孔徑較大,光學顯微鏡的焦深相對較淺(當放
大100倍時,其值約為lO微米當放大1000倍時,其值約為1
微米),然而這并不總是一個技術上的缺點.例如在微電泳時
,這種淺焦深能使我們觀察到電泳池中位置確鑿、形象清晰的質點

    除了分辨能力的問題以外,某物體的能見度述受物體與其
墑圍背景間之光學對比度的限制. 
    在研究膠體體系時,對于克服光學顯微鏡的能力限制,特
別有應用價值的兩種技術是電子顯微技術和暗場顯微技術.
前者的分辨極限大大提高,后者觀察所需之較小對比度
則大為降低. 

    透射電子顯微鏡
    為了增加顯微鏡的分辨能力,以便直接觀察膠體(和更小
的)‘物質,所用輻射光的波長應大大低于可見光的波長.現在
已能產生波長為0.01nm的電子光束,它可用電場或磁場聚焦,
其作用與透鏡相當.電子顯微鏡的分辨率所受到螅限制,與其
說是來自于輻射波長方面,不如說是來自于穩定高壓電源和矯
正透鏡象差的技術困難方面.因此,目前只能用數值孔徑小于
0.01的透鏡.借助于電子計算機以消去“噪聲黟后,分辨率可
達0.2nm,此數值與原子的線度相近.盡管分辨率高,單個原
子由于其位置的快速波動,看起來仍然是模糊的.

為觀察表面結構,較好的方法是使用復制型技術.方法之
一是將樣品沉積到一個剛剛剝開的云母表面上,再用真空蒸發
鍍上碳膜(或所需的一種重金屬),將樣品包埋住,然后置于水
面上.待薄膜離開云母,再用適當的溶劑溶去質點后,將所形
成的復制品裝在銅網上,即可供觀察之用.

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