普通熒光顯微鏡分辨率常識-帶圖像分析軟件
傳統的熒光顯微技術
在熒光顯微技術中，光譜由特定波長的光產生。熒光顯微鏡可使未
混有激發光的發射光的透射較大化，激發光的強度比發射光大得多。傳
統的熒光顯微鏡開始只用于固定的細胞。
檢測熒光在活細胞內分布的照相技術由于感光乳劑對低水平光的敏
感性低而嚴重受限，這樣，長時間曝光導致暫時清晰度較低，并可能造
成對細胞的光力學損傷和細胞運動偽跡。將熒光顯微技術與視頻圖像處
理系統結合，克服了這些困難，擴展了用熒光技術探測活細胞的使用范
圍。由于視頻的速度和敏感性較高，可以實時觀測并記錄熒光強度和分
布的快速變化。
傳統熒光顯微鏡技術有一個缺點是產生視野深度很小的圖像。由于光
學顯微鏡的分辨度是0.2 μm ，在2~3 um厚的焦距范圍內添加這么小的
圖像會使結構顯得模糊。對于超過10μm 厚的樣品，焦距以外來的光也
能使圖像衰變，在所研究的結構周圍產生一個彌散的暈輪。焦距外熒光
降低了對比度和清晰度。結合使用差異干涉相差顯微技術和超低光水平
敏感視頻檢測儀使人們能較長時間在活細胞內觀測熒光，而光力學損傷
和染料漂白都達到較低，且能提高清晰度。但是，去除焦距外熒光的較
好途徑是用共聚焦顯微技術。
