光學顯微鏡物鏡聚光能力小于數字孔徑大的物鏡
數值孔徑（N.A.）小的物鏡聚光能力小于數字孔徑大的物鏡。N.A.
對空間分辨率也很重要：N.A.大的透鏡比N.A.小的透鏡更能分辨標本中
的精細結構。放大倍數也很重要：高倍放大物鏡（100 x ）的聚光能力
弱于60 x或40x 的物鏡。
因此用40 x或60 x，N.A.為1.4 的油鏡可以獲得較好的較明亮的圖
像，因為這樣鏡頭能收集絕大部分的光、很好的分辨結構、并能有效地
放大并傳至檢測器、以高對比度成像（lnoue 1986）。
要獲得較佳效果，還要正確選擇蓋玻片的厚度，而且觀察熒光時，
要在蓋玻片的正下面，成像時則需標本固定介質的折射率與浸潤鏡頭的
介質的折射率（常為1.5 ）相匹配。要對含有水的標本成像，則需要一
種特殊的水浸潤鏡頭
倒置顯微鏡的光路。光線從光源（如水銀燈或氙燈）發出后，特定
波長的光線通過一個激發光濾光器，以激發特定的熒光染料。光線然后
到達二色光束分裂器，使得短波長的光反射至標本。波長較長的發射光
卻通過光束分裂器。
發射光濾光器將所有來自激發光濾光器的光線減弱，卻能讓標本發
射的任何熒光有效地通過。發射光的波長總是比激發光的波長大。插圖
：DAPI波光器的透光曲線。
點線表示激發光帶通濾光器，實線表示光束分裂器，短條線表示發
射光帶通濾光器
