顯微鏡數碼圖像的分辨率首先取決于光學圖像的分辨率
從顯微鏡獲得的數碼圖像的分辨率首先取決于光學圖像的分辨率。
分辨極限的定義是:樣品上兩個獨立的對象在光學圖像中也可清楚分開
所必需的較小距離。在顯微成像中,
數碼顯微圖像的分辨率進一步取決于并限制于構成CCD 芯片的單個
光電二極管的物理大小
相機像素大小決定了你需要利用放大多少倍的顯微鏡以獲得較高分
辨率的數碼圖像。讓我們利用一個實例來了解怎樣根據你所用的相機來
計算所需要的光學放大倍數。假如我們所用的物鏡的NA是1.4 ,那么在
535nm 波長的發射光下獲取綠熒光圖像的光學圖像中的分辨率極限為0.2
μm
我們假設使用的相機在技術數據表中顯示的像素大小是6.45μm 那
么我們需要將樣品上較小的可辨別的距離(0. 25m)在CCD 芯片上放大
到至少19.4μm ,占用3 個光電二極管(6.45X3=19.4 ),得到的結果
是96倍。為了得到這一放大倍數,我們可以單獨使用一個l00x 1.4NA
的物鏡或者使用60 X1.4NA 的物鏡與1.5X的附加放大設備組合。顯微鏡
制造商一般都會在研究級別的顯微鏡上生產帶有可選范圍在1.2X-2.OX
的附加放大設備(稱為光轉換器或放大轉換器)。但是,附加的放大倍
數也可以在相機上添加一個能夠放大的鏡頭來實現。