倒置生物顯微鏡適合用來觀察細胞培養實驗
對于在上海光學儀器一廠倒置顯微鏡下的觀察來說,細胞培養容器
塑料制品優于玻璃的。
玻璃的主要優點是價格便宜,所以在常規維持培養時應當
認真考慮。不論塑料和價廉而硬度低的玻璃都不能重復使用。
1.當倒掉瓶內液體的時候,應將培養瓶口在火焰上稍微
烤一下。在常規的操作中,作者只在倒掉液休后將瓶口火烤。
嚴格的技術要求在倒掉液體的前后都要進行火烤。
2.自培養物倒出的液體,應當經漏斗傾注入一個錐形瓶
中,隨后應將漏斗用1:10稀釋的漂白粉(Clorox)徹底清洗,
減少細胞間交叉污染的危險。
3.已經插入裝有細胞的瓶中的吸管,再不能插進貯存培
養基、鹽溶液或胰酶的瓶中。
4.決不將一個入的細胞都在同一天傳代培養。剩下的細
抱至少保存48小時(如果可能的話),然后再處理(傳代培養
或更換培養基)。小心地首先檢查傳代培養的細胞有無污染
的跡象(培養基混濁不清,異常的pH)
5.血清吸管在使用后,盡快地將每個吸管的棉花塞吹出,
然后倒過來放人浸液(1并7X)中。用過的吸管不應該任其
干涸。
6.使用你自己盛原液用的瓶子和盛吸管的吸管雄,決不
使用別人的。因為一旦污染發生,別人的或你自己的錯誤
操作,都可能對確定污染源造成困難。
7.當將裝有培養基的瓶子再放回冰箱中供以后使用時,
始終要保證將瓶帽塞緊,特別是對于C02緩沖荊。如果pH
變得太堿(鮮粉紅色—酚紅指示劑),培養基須補充C02氣
體1分鐘、或直到培養基的顏色達到正常(橙紅色)。不要將
C02氣流直接通人含有胎牛血清的培養基中,否則將產生過
多的泡沫。
8.為了節約,將舊培養瓶留著當作一個新培養瓶使用是
不明智的。這一方法的主要問題是:(1)有組織碎片或舊培
養基的堆積;(2)在傳代培養的過程中,細胞的分配不準確。
9.就常規的細胞維持來說,至少應該建立2個新的培養
物,然后,在下一次傳代培養時,一個可以進行傳代而另一個
保留下來,以防發生污染或生長出現問題。.培養物在一分為
四以后,不一定4個都建立(2個就足夠)。通常,保存數個傳
代培養的老培養物時,在每個傳代瓶子背面都注上日期是明
智的。保存3個以上不同時期的傳代培養瓶子,通常是不必
要的,而且不能合理利用培養箱的空間。
10.人的二倍體單層細抱,每周應該傳代培養或更換培養
基一次以上。它們容許一分為二或一分為四,習慣上不推薦
一分為八。
11.當細胞是用作染色體研究的時候,推薦用75平方厘
米的瓶子,因為它們比它英兩容量的瓶子有較大的表面,在細
胞生長到匯合時,75平方厘米的培養瓶一般每瓶含有6-
7 X 106次方的細胞,而8英兩的瓶子約含2-3 X 106次細胞。
不可在玻璃和塑料容器之間來回來去接種細胞。
12.在條例中未包括16英兩容量的瓶子。它們在容量上
和細胞增殖到匯合時的預期細胞數約相當于75厘米的錐形
瓶。因為它們不能架著放置,所以須占用較大的溫箱的空間