了解細菌的染色原理與用途-正置生物顯微鏡觀察細胞壁結構
革蘭氏染色法(Gram staining)
一、目的：了解細菌的特殊染色原理與用途。
二、原理：依據細菌的細胞壁化學組成不同，可分為革蘭氏陽性菌G(+)：細胞壁有多層勝肽
聚糖。革蘭氏陰性菌G(-)：細胞壁的外層由脂多糖及單薄的勝肽聚糖所組成。酒精脫色
過程中可將CV-I 復合物溶出，所以脫色為革蘭氏鑒別染色中的重要步驟。
三、材料：
1.顯微鏡 2.拭鏡紙 3.洋杉油 4.酒精燈 5.試管架 6.接種環 7.染色盤 8.鑷子
9.玻片夾 10.載玻片11.蒸餾水 12.衛生紙13.二甲苯 14.95%酒精
15.液態培養菌液：
○1Escherichia coli (E.coli)大腸桿菌 ○2Lactobacillus plantarum 胚芽乳桿菌
16.染色試劑：
○1結晶紫Crystal violet stain ○2碘媒染劑 Gram iodine mordant
○395%酒精 Ethyl alcohol，95% ○4番紅溶液 Safranin solution
四、方法：
(1)制作抹片：取slide 洗凈，烘干備用→無菌loop 菌液涂抹均勻→酒精燈余熱烘干
(2)染色
○1初染劑：結晶紫1min→背面水洗 ○2媒染劑：碘液1min→背面水洗
○3脫色劑：30sec(95%酒精)→背面水洗 ○4番紅復染：30sec→背面水洗
(結合成CV﹣I 化合物，增加結晶時與CW 結合力)
