孢子不易被染色許提升染色通透-顯微鏡高倍油鏡觀察
內孢子染色(Endospore staining)
一、目的：利用鑒別染色技術，將產生內孢子之細菌細胞及內孢子或游離孢子予以染色區別。
細菌細胞(繁殖體)→內孢子(endospore 綠色)→游離孢子(free spore)
二、原理：孢子不易被染色，透過加熱(80℃)，提升染色通透性，無菌體細胞可被水脫色，
再利用番紅覆染，使細菌細胞呈紅色，內孢子呈綠色。
三、材料：
1.顯微鏡 2.拭鏡紙 3.酒精燈 4.接種環 5.染色盤 6.載玻片 7.蒸餾水
8.95%酒精 9.洋杉油 10.二甲苯 11.水浴槽 12.玻片夾 13.鑷子
14.內孢子染料：○1孔雀綠(初染劑) ○2番紅染劑
15.菌種： ○1Escherichia coli (E.coli)大腸桿菌 ○2Bacillus subtilis 枯草桿菌
二、方法：
1. slide 洗凈烘干備用 2. 取1 loop 菌液于slide 涂開
3. 烘干固定 4. 加初染劑孔雀綠覆蓋菌膜
5. 80℃水浴加熱5~6min(初染劑不可干掉)
6. 放冷，背面水洗 7. 加番紅染劑30sec
8. 背面水洗 9. 拭干，顯微鏡高倍油鏡觀察 10. 畫圖并紀錄之
