顯微鏡觀察保細胞器結構-純化細胞實驗儀器
破碎細胞實驗監控圖像顯微鏡廠商 咨詢:010-64034191
對于像肝臟或腎臟這樣的組織,勻漿相對簡單;對于其他的組織和細胞培養物,
必須評估各種技術以確定一種策略來破碎細胞而不損傷目的細胞器。不管選擇什么技術,
建議用顯微鏡監控整個過程以確保細胞器結構上的完整。器官和組織在研磨或剪切以
后,碎片懸浮在通常含有0.25mo1/L蔗糖的補加了單價或二價陽離子、蛋白酶抑制劑和
鰲和劑等的等滲勻漿緩沖液中。與肝、腎等實體組織相比,多數組織培養細胞在
使用玻璃或Teflon/玻璃勻漿器時在等滲溶液中很難勻漿。相反,培養細胞在收獲后被懸浮
在低滲介質中,一旦細胞被勻漿,就加上濃縮的蔗糖溶液調節勻漿物到等滲狀態:
勻漿物在低滲溶液中的時間要越短越好,通常從開始收獲細胞到勻漿結束不要超過5分鐘一勻
漿物在低滲溶液中時間太長產生兩個問題:
細胞器開始破裂,由于溶酶體酶的泄漏.各種物質開始降解。為了避免低滲處理細胞,
可以用甘油處理(Graham and Sandal] 1979)用這種方法,細胞從周圍介質中吸收甘油并變得高滲:
這些細胞接著放人等滲或略微低
滲的介質中,多數細胞在不勻漿的情況下也會破裂,也有一些需要勻漿。甘油的濃度
高滲或低滲溶液中的蔗搪、處理的時問以及是否需要勻漿都取決于細胞的類型