親和層析純化的抗HRP及其耦聯物的抗體可以用來檢測HRP或者放大含有HRP試劑的效果。哺乳動物細胞的免疫染色中。因此這個抗體的優勢就是可以降低背景。由于抗HRP抗體不識別內源性的過氧化物酶的類似酶。A minomethylcoumarinAcetatAMCA

耦聯的AMCA 吸收光波長較大為350nm發熒光則為450nm對于熒光顯微鏡來說。用紫外濾板來觀察。由于AMCA 信號相對較弱，AMCA 可以用汞燈來激發。單標實驗中不推薦使用AMCA AMCA 和熒光素的熒光波長只有很小的重疊范圍，而和發出長波長熒光的熒光基團沒有或者只有極少的重疊，因此它較常用于多標記實驗中，比如免疫熒光顯微鏡和流式細胞儀。由于人眼不能很好的檢測藍色熒光，多標記的實驗中，AMCA 耦聯的二抗應當被用于檢測大量的抗原。AMCA 和熒光素一樣很快淬滅，使用抗淬滅劑可以減輕。如果使用在流式細胞儀中，AMCA 可以用汞燈或者水冷卻的氬光燈激發，因為它發出的光線是光譜的紫外區。

FluoresceinIsothiocyanFITC

耦聯的熒光素基團吸收的較大波長為492nm發射的較大波長為520nm由于FITC被使用了很長時間而且產量很大。因此要和抗淬滅劑一起使用。DTA F熒光素的一個衍生物，FITC被廣泛應用。熒光素的較大缺點是淬滅快。激發和發射波長均和FITC相同。當和鏈霉親合素耦聯時，因為熒光強度上有明顯的區別，較好不使用FITC而使用DTA F

CyanindyeCy2.Cy5 Cy3.

Cy2耦聯基團激發波長為492nm發光為波長510nm綠色可見光。Cy2和FITC使用相同的濾波片。由于Cy2比FITC光下更穩定。要避免使用含有磷酸化的苯二胺的封片劑。染色片貯存后會導致熒光微弱和擴散。因為這種抗淬滅劑和Cy2反應。

背景更弱。熒光顯微鏡的Cy3耦聯基團激發光的較大波長為550nm較強發射光為570nm因為激發光和發射光波長很接近PITC,更穩定。Cy3和Cy5比其他熒光團探針要更亮。熒光顯微鏡中，可使用和PITC一樣的濾波片。

氦氖燈（543nm或者汞燈（546nm下則約75％。Cy3可以和熒光素一起作雙標。Cy3還可以和Cy5一起在共聚焦顯微鏡實驗中作多標記。 Cy3氬光燈（514nm或528nm下可以被激發出50％的光強。

Cy5耦聯基團的激發波長較大650nm發光波長較大670nm氪氬燈（647nm下它可被激發出98％的熒光。而且不能用汞燈作理想的激發。通常觀察Cy5時采用具有合適激發光和遠紅外檢測器的共聚焦顯微鏡。水相封片劑中應當加入抗淬滅劑。使用保守的外表熒光顯微鏡時，氦氖燈下（633nm為63％。Cy5可以和很多其他熒光基團一起用在多標記的實驗中。由于它較大發射波長在670nmCy5很難用裸眼觀察。不推薦使用Cy5

TetramethylRhodaminIsothiocyanPITC

TexaRedP RhodaminRed-XRRX.

RRX尤其有用，可以和Cy2或者FITC和Cy5一起使用，因為RRX發射波長在Cy2和Cy5中間，而且和這兩者覆蓋都很少。氪氬燈激發光為488nm598nm和647nm分別是Cy2FITC,使用RRX和P可以得到更好的顏色區分。使用裝有氪氬燈的激光共聚焦掃描顯微鏡作三標記的實驗時。這些若丹明的衍生物耦聯基團具有不同的吸收波長 550,570,596nm和較大發射波長（570,590,620nm盡管PITC經常和FITC一起在雙標記實驗中使用。RRX和Cy5理想激發波長。因為FITC和PE可以被氬燈的488nm波長激發,流式細胞儀中用FITC作雙標，另一種用藻紅蛋白（PE耦聯基團要比若丹明好，

總結下來

熒光團探針的選擇有兩個重要標準：
A. 熒光顯微鏡的光源，濾片，檢測系統。
B. 多標記中對探針色彩區分程度的要求。

 例如，若丹明紅-X (RRX)和德克薩斯紅(TR)熒光素的區別就比四甲基若丹明（TRITC）或者Cy3的區別明顯。
C. 靈敏度。比如，Cy3和Cy5就比其他的熒光團探針要亮。

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