日本在熒光顯微鏡下培育出人造精子
將GFP小鼠的骨髓細胞植入到白消安(Busulfan)處理小鼠和c-kit突變小鼠睪丸中!10-12周后殺鼠觀察植入情況。一側睪丸取出并將曲細精管分散后直接在熒光顯微鏡下鏡檢,另一側固定后行免疫組化染色(Sertoli細胞用的 marker是FSH-R, Leydig 細胞用的標志物是P450scc, 生殖細胞用的標志物是VASA)。 供體細胞取自6-8周的GFP小鼠,先PBS洗,34°C 0.05g/ml 膠原酶+0.025% 胰酶消化, 洗離心等等。注射供體細胞的玻璃針在頂端磨出一帶斜面的鋒利尖口。先用無菌的30號注射針頭在輸出管上扎一小口, 再將裝有供體細胞的玻璃針沿小孔注入約10 l 的細胞懸液。 在免疫組化染色標本中, 使用抗GFP抗體來追蹤哪些細胞是供體來源的。 結果:在白消安(Busulfan)處理小鼠, 來源于供體的三種細胞類型(Sertoli細胞、Leydig 細胞和生殖細胞)均能在移植的睪丸中發現, 不過來源于供體的、帶GPF的生殖細胞發育停留在精母細胞早期而不繼續發育。 在c-kit突變小鼠睪丸中, 僅發現了兩種細胞類型(Sertoli細胞、Leydig 細胞)。外源的干細胞能在睪丸的微環境中分化和發育。
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